Mikroskopie spór, hyf, cystidií, tramvají, k identifikaci hub

Složený mikroskop vhodný pro studium hub

Níže uvedené informace jsou shrnutím výňatku z nejnovější knihy Pat O'Reillyho „Fascinováno houbami“ . Veškeré podrobnosti a ukázkové stránky najdete v našem knihkupectví, kde si můžete objednat kopii podepsanou autorem online ... (Kniha také obsahuje glosář mykologických pojmů a zde máme souhrnnou verzi, která pomůže začátečníkům ...)

Mikroskopie a fotomikografie

Pokud nemůžete identifikovat houbu v terénu, možná budete chtít přinést vzorek domů pro další studium. Nemá to smysl, pokud doma nemůžete udělat něco, co byste v terénu nedokázali. Mikroskopické vyšetřování se nejlépe provádí uvnitř, když máte dostatek času na správné věci. Zde je několik tipů pro výběr a použití mikroskopu k tomuto účelu.

Mikroskopy pro hračky jsou v pořádku, když se díváte na zvířecí a rostlinné struktury, ale pro mykologii opravdu potřebujete dobrý mikroskop. Je to proto, že jemné struktury hub jsou velmi malé - některé se blíží hranici toho, co lze vyřešit pomocí světla. Vlnové délky rentgenového záření jsou mnohem kratší než vlnové délky světelných vln a pomocí rentgenové mikroskopie lze studovat mnohem více podrobností. Ale pokud si myslíte, že optický mikroskop je drahý nástroj pro něco, co je pro většinu z nás jen koníčkem, neuvažujte ani o přeměně svého domu na rentgenový mikroskop v dolní části rozsahu.

Spóry azonitů Lactarius
Spory azonitů Lactarius , pozorované čočkou mikroskopu s olejovým ponořením

Ke studiu spór hub, bazídií, cystidií, sphaerocyst a dalších drobných rysů hub budete potřebovat mikroskop schopný zvětšení minimálně x 400. V ideálním případě přejděte na mikroskop s maximálním zvětšením x 1000, ale pro získání přiměřeně čistého obrazu při tak velkém zvětšení by měl mít čočku s olejovou imerzí.

Rozměry a ozdoby (například ostnaté bradavice - viz obrázek vlevo) spor jsou klíčové identifikační znaky, a proto můžete měřit rozměry věcí, na které se díváte, budete potřebovat okulár, který má oční mikrometr nebo nějaký jiný prostředky kalibrace. Pokud zjistíte, že pokyny dodané s mikroskopem jsou matoucí (nebo pokud máte to štěstí, že se rozhodnete vyjednávat z druhé ruky bez příručky), bude vám téměř jistě někdo z vaší místní skupiny hub ochoten pomoci s nastavením a kalibrací vašeho Systém.

Můj vlastní mikroskop je trinokulární, a proto je adaptér fotoaparátu použitelný, i když se dívám okuláry. (Většinu času jednoduše sleduji obraz, který se přenáší na obrazovku počítače.)

Mezi další funkce mikroskopu, které musíte mít, patří:

  1. Nastavitelné osvětlení, nejčastěji přímo pod sáně, a nazývané osvětlení ve světlém poli. (U biologických nástrojů je osvětlení tmavého pole také zespodu, ale pod úhlem, který zajišťuje, že přímé světlo nevstupuje do objektu; vyžaduje buď speciální kondenzátor tmavého pole, nebo pro malé zvětšení černý doraz vložený do světelné dráhy.)
  2. Ovládací knoflíky pro pohyb mechanického stolku, který drží snímek
  3. Ovládací prvky hrubého a jemného zaostření

Barvení chemikálií

Sphaerocysty ve struktuře kmene Russula cyanoxantha, spalovače uhlí
Za jeho lámavost jsou zodpovědné sferocysty ve stopkové struktuře Russula cyanoxantha , lesní houby běžně známé jako hořák na dřevěné uhlí. Tento snímek byl pořízen mikroskopem se zvětšením x600. Materiál stonku na sklíčku byl obarven konžskou červení.

Jemná struktura spór a mnoho dalších drobných částí hub, na které se budete chtít podívat pod mikroskopem, je téměř úplně průsvitná. Mohou být jasně viditelné, pouze pokud byly obarveny. Jako další pomoc při identifikaci mnoho hub produkuje výtrusy, které při kontaktu s určitými chemikáliemi mění barvu, označují se jako činidla (kvůli reakci při kontaktu výtrusů s nimi). Zde jsou některé z chemikálií, skvrn a činidel nejčastěji používaných v mykologické mikroskopii:

Destilovaná voda

(Ano, stará dobrá H2O!) Pokud si chcete prohlédnout drobné předměty a vidět jejich přirozené barvy, je voda ideálním smáčedlem. Voda z vodovodu obsahuje chemické přísady, které by mohly omezit životnost skluzavky, a dešťová voda je kyselá a stejně problematická, ale destilovaná voda je levná a snadno dostupná. Možná budete muset přidat kapku fotografického smáčedla, abyste zabránili zkreslení obrazu kvůli malým vzduchovým bublinám připojeným ke sporům nebo jinému materiálu předmětu. (Prostředek na mytí nádobí funguje!) Přidání asi 10% glycerinu zajistí, že sklíčka vydrží mnohem déle, než vyschnou.

Amoniak (NH3)

Tato užitečná, ale potenciálně nebezpečná chemikálie vydává extrémně štiplavou páru, a proto musí být láhev vždy bezpečně uzavřena, kromě použití. (Amoniak pro domácnost v jakémkoli obchodě s hardwarem je v pořádku.) Stejně jako činidlo, které způsobuje změnu barvy u některých druhů hub, je amoniak součástí některých dalších činidel. Čistý amoniak je plyn při normální pokojové teplotě a pro mykologické použití je běžnou koncentrací 10% roztok v destilované vodě. To je silné a pokud se dostane do očí, způsobí to vážné poškození.

Síran železnatý (FeSO4)

Mnoho milovníků hub a mykologů nese ve své polní soupravě krystal síranu železnatého, známý lidově jako železné soli, pro otírání o houby (zejména křehké žábry) za účelem kontroly barevné reakce. Nechoďte na úkor nákupu krystalů farmaceutické kvality; věci prodávané v zahradních centrech jako zabiják mechů a pro snížení zásaditosti půdy jsou levné nečistoty (oops!) a fungují stejně dobře.

Hydroxid draselný (KOH)

Používá se jak jako montážní médium (obvykle společně s barvicí chemikálií), tak jako činidlo, ať už v terénu nebo vzadu na základně. Povrchy víček nebo žaber některých hub dramaticky mění barvu, když jsou v kontaktu s KOH; mohou podle druhu žloutnout, červeně, purpurově, olivově nebo černě. Takže když vytvoříte sklíčko mikroskopu pomocí KOH, nejen že se zachová proti rozpadu, ale můžete také vyvolat diagnostickou barevnou reakci, která může někdy přispět k procesu identifikace stejně jako data o velikosti a tvaru získaná mikroskopem.

Melzerovo činidlo

Tento koktejl chemikálií je obtížné získat, protože jednou z rozhodujících složek je potenciálně nebezpečná látka chloralhydrát (droga znásilnění). Ostatní složky se snadno získávají - krystaly jódu, jodid draselný a destilovaná voda. Jód reaguje se škrobovými látkami a vytváří intenzivní modročernou barvu a spóry hub, které obsahují škrob, se označují jako „amyloid“. Pokud se připojíte ke skupině hub ve Velké Británii, můžete získat Melzerovo činidlo prostřednictvím Asociace britských skupin hub (ABFG). Spory houbových druhů mohou při barvení Melzerovým činidlem podléhat diagnostickým změnám barev. Spory se nazývají:

  1. Amyloid, pokud se změní na modročernou barvu.
  2. Dextrinoid, pokud se změní na červenohnědou barvu.
  3. Inamyloid (nebo negativní), pokud pouze nažloutnou nebo se vůbec nezmění.

Tyto termíny se používají v polních průvodcích, kteří uvádějí znaky chemických testů pro každý druh.

Skvrny

Asci z Poronia punctata
Asci z Poronia punctata , hřebík na nehty

Hlavní důvody pro použití skvrn při výrobě mikroskopických sklíček jsou:

  1. zvýšit kontrast v mikroskopickém obrazu
  2. zvýraznit konkrétní tkáňové struktury

Skvrny se často používají společně s jinými chemikáliemi, které pomáhají předcházet rozpadu nebo vysychání předmětného materiálu.

Příklady barvicích činidel zahrnují:

Kongská červená

Vynikající univerzální skvrna pro sledování jemných detailů hyfálních struktur (například viz obrázek žábry Tramvaj Amanita rubescens vpravo, kde jsou vyznačené rozměry v mikrometrech.) Dodává se jako prášek a nejlépe se rozpustí v 10% roztok amoniaku.

Safranin

Další skvrna, která produkuje jádra červených krvinek.

Lactophenol Cotton Blue

Toto skvrny od chitinu, takže takové struktury, jako je výzdoba spór, se zobrazují mnohem jasněji než u většiny ostatních skvrn (včetně Kongo červené).

Výstřel na rozloučenou - no, tohle má co do činění s vyhýbáním se odletu. Mezi výše zmíněné chemikálie patří některé vážně žíravé, kyselé a toxické látky, a proto musí být skutečně skladovány tam, kde se jich děti nemohou zmocnit. Například výpary z amoniaku mohou popálit oči - ve skutečnosti některé testy vyžadují pouze to, aby čpavková pára procházela houbovou tkání a vyvolala tak změnu barvy.

Trinokulární mikroskop

Bezpečný trezor by mohl zachránit život. Jeden mám přišroubovaný ke zdi vedle lavice, kde mám svůj mikroskop (viz obrázek výše), a je ideální pro skladování chemikálií, žiletek, sklíček atd.

Výtrusy

Nahoře: výtrusy houby pomerančové kůry Aleuria aurantia

Vytváření snímků

Nejjednodušší snímky jsou spory. (Jsou zde zobrazeny výtrusy Agaricus bisporus , komerční houby, které jsou vždy k dispozici v obchodech s potravinami a supermarketech.) Jediné, co musíte udělat, je umístit houbu plodnou stranou dolů na mikroskopické sklíčko a počkat hodinu nebo dvě.

Na rozdíl od toho, když se snažíte udělat pěkný spór, nemusíte ani všechno zakrývat, i když to obecně připomínám, že pod ním je kousek skla s ostrými hranami. Vzhledem k tomu, že chcete mít možnost vidět samostatné výtrusy, nikoli určovat barvu výtrusů, když se hromadí vrstva po vrstvě, nepotřebujete hustý tisk, takže ji nesmíte nechat příliš dlouho.

Pokud máte na sklíčku trochu spórového prachu, přidejte kapku smáčecího prostředku (mýdlová voda to udělá!) Nebo vhodnou skvrnu, pokud jsou spory spíše čiré než barevné, a na vrchní stranu položte krycí sklíčko. Melzerovo činidlo je dobrá volba, protože současně se zlepšením kontrastu, pokud držíte sklíčko na světle, uvidíte, zda jsou spory amyloidní, dextrinoidní nebo inamyloidní - z toho později ...

Snímek - 1

Vytváření diapozitivů z velmi tenkých plátků houbové tkáně je obtížnější a měli byste očekávat více neúspěchů než úspěchů. Obtíž je vytvořit opravdu tenký a rovnoměrný řez, který obsahuje funkce, které chcete studovat. Na žábrách agarikoidních druhů si možná budete chtít prostudovat bazidia - (obvykle) kyjovitá rozšíření hyphal, na nichž jsou přenášena sterigmata a spory.

Jakmile odříznete tenký pramen buď pomocí ostré žiletky, nebo odtrhnete proužek pomocí pinzety s jehlovým nosem, postup je stejný jako u spór. Položte vzorek na podložní sklíčko, přidejte několik kapek skvrny a poté krycí sklíčko, jemným tlakem zarovnejte řez. Buďte jemní: většina krycích sklíček má tloušťku něco málo přes jednu desetinu milimetru a velmi snadno se zlomí. Přebytečné skvrny odstraňte pomocí absorpční tkáně a počkejte několik minut, dokud skvrna nepronikne vzorkem.

Snímek - 2

Variancí tohoto přístupu - poněkud jednodušší, ale spíše technikou „hit and miss“ - je zmáčknout poměrně tenký vzorek mezi dvěma diapozitivy - se štěstím, že kousky, které vás zajímají, budou chrlit na jednom z okrajů. K zvýraznění těchto hranových prvků použijte mořidlo jako dříve.

Při studiu bazidiomycet pod mikroskopem se neomezujete pouze na velikost a tvary spór. Můžete také vyšetřit různé druhy cystidií. Jedná se o hyfální struktury, které vystupují z různých povrchů. V závislosti na tom, kde se vyskytují, dostávají různý název: pleurocystidie se vyskytují na žaberních tvářích, cheilocystidie jsou ty na hranách žáber, pileocystidie se vyskytují na povrchu víčka a caulocystidie jsou ty, které se nacházejí na stonku houby. Tvary cystidií v každé z těchto lokalit se mohou lišit a tyto rozdíly vám mohou pomoci, eh ... rozlišovat mezi druhy.

Žábrová tramvaj z Hygrocybe chlorophana

Na výše uvedeném mikrofotografii je žaberní trama z Hygrocybe chlorophana , voskovky zlaté. Ne všechny voskové čepičky lze identifikovat na úrovni druhů zkoumáním makroskopických znaků. Některé lze nejlépe určit jejich vyšetřením pod mikroskopem, zatímco některé vyžadují makroskopické i mikroskopické vyšetření. Rozdrcení malého kousku žaberního materiálu (žábry) mezi sklíčkem a krycím sklíčkem vám umožní studovat strukturu tkáně. Některé mají protkané hyfy; některé jsou pravidelné (hyfy ležící navzájem rovnoběžně) a jiné jsou subregulární (někde mezi nimi). Dlouhé buňky Hygrocybe chlorophana jsou zde jasně viditelné, zatímco hyfální buňky například Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) jsou mnohem kratší.

Software, díky němuž je fotografování mikroskopem méně utrpením

Pokud jste někdy zkoušeli pod mikroskopem vyfotografovat spóry nebo jiné kousky houbové tkáně, budete vědět, jak obtížné je vše zaostřit. Získáte jednu část ostrou a zbytek je rozmazaný. Problém je způsoben velmi omezenou hloubkou ostrosti dostupnou při vysokém zvětšení. Na pomoc vám může přijít specializovaný, ale levný software. Vezmete několik obrazů se zaostřením v různých hloubkách do vzorku tkáně a software vytvoří obraz pomocí zaostřených částí vašich různých obrazů. Měření spór plísní je mnohem snazší díky programu s názvem Mycocam4. Produkoval mykolog Richard Shotbolt a je k dispozici ke stažení zdarma na www.shotbolt.com - a jeho použití je velmi jednoduché.

Mikroskopie je odborný předmět, do něhož se každý, kdo se zajímá o houby, nechce zapojit. Pro mnohem více informací o tomto předmětu existují odborné texty a pro pomoc při výběru a nastavení mikroskopu webové stránky spolehlivých nezávislých dodavatelů, jako je Brunel Mikroskopy jsou dobrým výchozím bodem. Obvykle je možné domluvit návštěvu s cílem prodiskutovat vaše konkrétní potřeby a vyzkoušet několik alternativ.

Příklady

Na mnoha našich stránkách o druzích hub uvidíte příklady fotografií spór pořízených pomocí mikroskopu s přílohou digitálního fotoaparátu. Například viz Laccaria bicolor , která má zajímavou výzdobu spór; a Cuphophyllus pratensis , který má elipsoidní nebo slzovitésubglobózní výtrusy.


Pokud vám tyto informace pomohly, jsme si jisti, že by vám velmi pomohla také naše kniha Fascinovaná houbami od Pat O'Reilly. Kopie podepsané autorským podpisem se speciální slevou jsou k dispozici zde ...

Další knihy o přírodě od First Nature ...